G_{β 1} CRISPR Activationプラスミド (h): sc-401901-ACT

GNB1 はヒトの Gβ1 サブユニットをコードしており、活性化した GPCR（G タンパク質共役受容体）を下流のエフェクターへ結び付ける三量体 G タンパク質の中核構成要素です。Gβγ 複合体および Gα 複合体の形成を通じて、Gβ1 は cAMP/PKA や PLCβ 依存性の Ca²⁺/PKC 経路といったセカンドメッセンジャーシグナルを調節し、受容体の脱感作、イオンチャネルの調節、MAPK カスケードの活性化への関与を形作ります。GNB1 依存的なシグナルは、神経伝達、細胞遊走、代謝制御など多様な細胞プロセスに影響します。GNB1 活性の変化や G タンパク質シグナルの不均衡は、神経学的表現型や、疾患メカニズム研究に関連する GPCR 制御経路のより広範な破綻と関連付けられています。

Gβ 1 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性GNB1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

Gβ 1 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における GNB1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はGNB1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性Gβ 1の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のGNB1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるGβ 1依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびGNB1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるGβ 1経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。