G_{α 13} Double Nickaseプラスミド (h): sc-401180-NIC

GNA13は、G12/13ファミリーに共役するGPCRからのシグナルを伝達する主要な因子である、ヒトのヘテロ三量体Gタンパク質αサブユニットGα13をコードします。活性化されるとGα13はRhoGEFを介してRhoA依存性経路を刺激し、アクチン細胞骨格の再構築、細胞接着、遊走、収縮性を制御します。さらにその下流では、転写プログラムやメカノトランスダクションにも影響が及びます。このシグナル軸は、血管トーン、血小板活性化、免疫細胞トラフィッキングを制御する経路とも交差しており、腫瘍性GPCRシグナル伝達や細胞運動性の変化との関連でしばしば研究されています。GNA13の活性が破綻すると、異常なRhoシグナルや、モデル系における浸潤性の亢進、組織構築の破綻といった疾患関連表現型と関連することが示されています。

Gα 13 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における GNA13 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、GNA13内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、GNA13の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、GNA13が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。