GSKIP Plasmide Double Nickase (h): sc-412211-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- GSKIP Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il GSKIP Double Nickase Plasmid (h) e il GSKIP Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira GSKIP. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
GSKIP Plasmide Double Nickase (h) | sc-412211-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
GSKIP Plasmide Double Nickase (h2) | sc-412211-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
GSKIP (GSK3β interaction protein) codifica una piccola proteina scaffold che si lega alla glicogeno sintasi chinasi 3β e contribuisce a posizionare questa chinasi all’interno di complessi di segnalazione multiproteici. Attraverso la modulazione degli eventi di fosforilazione dipendenti da GSK3, GSKIP può influenzare vie collegate alla segnalazione Wnt/β-catenina, alla dinamica della segnalazione cAMP/PKA e, più in generale, al controllo delle decisioni sul destino cellulare, della proliferazione e dei programmi di differenziamento. Un’alterata regolazione delle reti incentrate su GSK3 è frequentemente associata a crescita disregolata e a fenotipi dello sviluppo, rendendo GSKIP un nodo utile per studiare il cross-talk tra vie di segnalazione. In quanto proteina umana con ruoli di scaffolding per chinasi, GSKIP supporta studi meccanicistici sulla specificità e compartimentalizzazione della segnalazione in contesti cellulari rilevanti per la patologia.
GSKIP Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus GSKIP nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di GSKIP. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di GSKIP. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con GSKIP interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.