GSK3 beta Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400090-ACT

O GSK3B humano codifica a glicogénio sintase quinase 3 beta (GSK3β), uma quinase de serina/treonina constitutivamente ativa que integra sinais de nutrientes e de fatores de crescimento para coordenar decisões de destino celular. A GSK3β é um regulador negativo central da sinalização canónica Wnt/β-catenina e também participa em processos associados a PI3K–AKT, ao metabolismo da insulina/glicogénio, Hedgehog, Notch e NF-κB, influenciando a transcrição, proliferação, apoptose e diferenciação. Por meio da fosforilação de diversos substratos, como a β-catenina e múltiplos reguladores transcricionais, a GSK3β afeta a dinâmica do citoesqueleto, o controlo do ciclo celular e a homeostase metabólica. A desregulação da sinalização de GSK3B tem sido implicada em vários contextos de investigação, incluindo a biologia do cancro, vias associadas à neurodegeneração, inflamação e modelos de doença metabólica.

GSK3 beta O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de GSK3B sem alterar a sequência de ADN subjacente.

GSK3 beta O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus GSK3B em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição GSK3B, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de GSK3 beta. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus GSK3B nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de GSK3 beta no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via GSK3 beta em células tumorais com expressão de GSK3B silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.