GSDMDC1 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-406596-ACT

GSDMD（ガスダーミンD；GSDMDC1としても言及される）は、炎症性の細胞死において膜に孔を形成するエフェクターをコードしており、インフラマソームシグナル伝達の下流で起こるタンパク質分解（プロテアーゼ）による切断によって活性化されます。カスパーゼ1、またはカスパーゼ4/5/11経路によって切断されると、N末端断片が膜上でオリゴマー化し、パイロトーシスを駆動するとともに、IL-1ファミリーサイトカインの放出を促進します。これにより、自然免疫による感知と溶解性の細胞死が結び付けられます。この軸はNLRP3などの関連インフラマソーム経路とも統合され、抗微生物防御や無菌性炎症の形成に関与します。GSDMD活性の制御破綻は、慢性炎症状態、敗血症関連炎症モデル、腫瘍–免疫相互作用に関与すると示唆されており、ヒト系における細胞死およびサイトカイン生物学の機序研究を促す要因となっています。

GSDMDC1 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性GSDMDの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

GSDMDC1 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における GSDMD 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はGSDMD転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性GSDMDC1の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のGSDMD遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるGSDMDC1依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびGSDMD発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるGSDMDC1経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。