GS28 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-404357-ACT

ヒトのGOSR1は、ゴルジSNAP受容体複合体の構成因子であるGS28をコードしており、COPI依存的な逆行輸送およびゴルジ内膜融合を支える小胞輸送SNAREとして機能します。ER–ゴルジ間輸送とゴルジスタックの動態を協調させることで、GS28はゴルジ体の構築、糖鎖付加能、ならびに分泌経路全体にわたる正確なカーゴ選別の維持に寄与します。SNARE介在性輸送の攪乱は、細胞ストレス応答、プロテオスタシスの変化、そして輸送プログラムの制御異常と関連しており、神経変性、感染生物学、がん細胞の分泌表現型の研究でしばしば取り上げられます。膜融合装置の中核構成要素として、GS28は、ゴルジ輸送がシグナル伝達、オルガネラ恒常性、タンパク質プロセシングに及ぼす影響を解明するための解析しやすい結節点（ノード）となります。

GS28 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性GOSR1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

GS28 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における GOSR1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はGOSR1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性GS28の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のGOSR1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるGS28依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびGOSR1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるGS28経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。