GS1 Double Nickaseプラスミド (h): sc-405996-NIC

ヒトPUDPは、ピリミジン系ヌクレオシド・サルベージネットワークに属する酵素であるシュードウリジン-5′-ホスファターゼ（GS1）をコードしており、シュードウリジン一リン酸を脱リン酸化してシュードウリジンへ変換することで、ヌクレオチド恒常性およびRNA代謝回転を支えます。この反応は、リボース-1-リン酸や関連中間体をより広範な代謝経路へ供給することで、RNA修飾の異化（分解）を中心炭素代謝と結び付けます。PUDP/GS1機能の変化は、細胞内のヌクレオチドバランスや代謝状態を乱し得ますが、これらの過程はしばしば増殖ストレスやゲノム維持プログラムと連動します。そのためPUDPは、RNA修飾代謝、ストレス適応、ならびに疾患関連の細胞モデルにおける経路再配線の機構解明研究において注目されています。

GS1 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における PUDP 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、PUDP内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、PUDPの機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、PUDPが破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。