Grim19 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-403264

Panoramica

NDUFA13 (GRIM19) codifica una subunità accessoria conservata del complesso I mitocondriale, che sostiene la fosforilazione ossidativa e il corretto trasferimento di elettroni all’interno della catena respiratoria. Grim19 contribuisce al mantenimento del potenziale di membrana mitocondriale e della bioenergetica cellulare, collegando il metabolismo mitocondriale all’omeostasi redox e alla suscettibilità all’apoptosi. Oltre al suo ruolo nell’assemblaggio e nella funzione del complesso I, è stato riportato che GRIM19 interagisce con programmi di trasduzione del segnale, come la trascrizione dipendente da STAT3, fornendo un collegamento tra lo stato mitocondriale e la regolazione genica nucleare. La disregolazione di NDUFA13/Grim19 è associata a fenotipi di disfunzione mitocondriale ed è stata studiata in contesti in cui respirazione alterata e segnalazione da stress contribuiscono a stati cellulari rilevanti per la patologia.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Grim19 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene NDUFA13 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del NDUFA13 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto NDUFA13 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Grim19.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di NDUFA13 per lo studio della segnalazione di Grim19, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni NDUFA13 critici per la funzione di Grim19
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di NDUFA13 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Grim19 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal Grim19 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus NDUFA13. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Grim19 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR Grim19 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia NDUFA13 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio NDUFA13 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.