Plásmido CRISPR de Activación (h) GRHL2: sc-408284-ACT

GRHL2 (factor de transcripción tipo grainyhead 2) es un factor de transcripción humano que se une al ADN de manera específica de secuencia y regula la especificación del linaje epitelial, la diferenciación y la formación de barrera mediante el control de programas génicos relacionados con las uniones célula–célula, la polaridad y el citoesqueleto. Influye en la transición epitelio‑mesénquima (TEM) y en redes de señalización relacionadas al modular circuitos transcripcionales vinculados con la adhesión y la motilidad, dando forma a la morfogénesis tisular y a la homeostasis. La actividad desregulada de GRHL2 se ha asociado con cambios en la plasticidad epitelial y con la reprogramación transcripcional observada en biología del cáncer y en trastornos del desarrollo, lo que lo convierte en un nodo útil para estudiar el control del estado epitelial. La regulación centrada en GRHL2 también es relevante en modelos de reparación de heridas, maduración de organoides y mecanismos que gobiernan la integridad epitelial bajo estrés.

GRHL2 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de GRHL2 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

GRHL2 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus GRHL2 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional GRHL2, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de GRHL2. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo GRHL2 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de GRHL2 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía GRHL2 en células tumorales con expresión de GRHL2 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.