GRHL2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-408284-ACT

GRHL2 (fator de transcrição 2 do tipo grainyhead) é um fator de transcrição humano que se liga ao DNA de forma sequência-específica e regula a especificação de linhagem epitelial, a diferenciação e a formação de barreira por meio do controle de programas gênicos de junções célula–célula, polaridade e citoesqueleto. Ele influencia a transição epitélio-mesenquimal (EMT) e redes de sinalização relacionadas ao modular circuitos transcricionais ligados à adesão e à motilidade, moldando assim a morfogênese e a homeostase dos tecidos. A atividade desregulada de GRHL2 tem sido associada a alterações na plasticidade epitelial e à reprogramação transcricional observadas na biologia do câncer e em distúrbios do desenvolvimento, tornando-o um nó útil para estudar o controle do estado epitelial. A regulação centrada em GRHL2 também é relevante para modelos de reparo de feridas, maturação de organoides e mecanismos que governam a integridade epitelial sob estresse.

GRHL2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de GRHL2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

GRHL2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus GRHL2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição GRHL2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de GRHL2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus GRHL2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de GRHL2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via GRHL2 em células tumorais com expressão de GRHL2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.