Plasmide CRISPR d'Activation (h) gremlin-1: sc-401244-ACT

GREM1 code la grémline-1, une glycoprotéine sécrétée qui agit comme antagoniste extracellulaire des protéines morphogénétiques osseuses (BMP2, BMP4 et BMP7), modulant ainsi la signalisation de la superfamille BMP/TGF-β au cours du développement et de l’homéostasie des tissus adultes. En modulant la disponibilité des ligands, la grémline-1 influence les choix de destinée cellulaire, les interactions épithélio-mésenchymateuses et des programmes de remodelage tels que la prolifération, la différenciation et la fibrose. Une expression dérégulée de GREM1 a été associée à une communication stroma–épithélium altérée, à un dépôt anormal de matrice extracellulaire et à une signalisation microenvironnementale pro-tumorigène dans de multiples contextes pathologiques, notamment les affections fibrotiques et des voies liées au cancer. Ces caractéristiques font de GREM1 une cible utile pour des études mécanistiques du contrôle de la voie BMP et des réseaux de signalisation extracellulaire.

gremlin-1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de GREM1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

gremlin-1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus GREM1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription GREM1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de gremlin-1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus GREM1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de gremlin-1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie gremlin-1 dans les cellules tumorales présentant une expression de GREM1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.