Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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GR/NR3C1/Glucocorticoid Receptor Double Nickaseプラスミド (m): sc-420693-NIC
- 対象生物種: mouse
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- GR/NR3C1/Glucocorticoid Receptor Double Nickaseプラスミド (m)はペアのプラスミドを含みます。それぞれのプラスミドはD10A変異したCas9 nuclease、及びCRISPR/Cas9 KOの対応よりも高い特異性で遺伝子発現をノックアウトするように設計された標的特異的な20 ntガイドRNA (gRNA)をコードします。
- ペアリングしたガイドRNAは、約20 bpでずらすことにより、ゲノムDNAの特定Cas9媒介のdouble nickingを可能にし、DSBを模造します。
- ペアの1つのプラスミドは選択用のピューロマイシン耐性遺伝子を含みます；ペアのほかの1つのプラスミドは、視覚的にトランスフェクションを確認するGFPマーカーを含みます。
- GR/NR3C1/Glucocorticoid Receptorダブルニカースプラスミド（m）およびGR/NR3C1/Glucocorticoid Receptorダブルニカースプラスミド（m2）は、Nr3c1を標的とする異なるペアのgRNA設計をコードしています。いずれか一方、あるいは両方のデザインが利用可能である場合があります
- トランスフェクションの後、遺伝子ノックアウト効果は、抗体を用いたWB、IFまたはIHCによって検定されることができます: GR/NR3C1/Glucocorticoid Receptor 抗体 (G-5): sc-393232
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
GR/NR3C1/Glucocorticoid Receptor Double Nickaseプラスミド (m) | sc-420693-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
GR/NR3C1/Glucocorticoid Receptor Double Nickaseプラスミド (m2) | sc-420693-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
マウスのNr3c1はグルココルチコイド受容体（GR/NR3C1）をコードしており、リガンドによって活性化される核内受容体として、グルココルチコイドのシグナルを状況依存的な転写プログラムへと変換する。ホルモン結合後、GRはグルココルチコイド応答エレメントへの直接結合や、他の転写因子へのテザリング（係留）を介してクロマチンのアクセシビリティと遺伝子発現を制御し、NF-κBやAP-1のシグナル伝達と統合されることで炎症応答およびストレス応答の形成に関与する。NR3C1の活性は代謝、概日生物学、アポトーシス、免疫細胞分化に影響し、その制御異常はグルココルチコイド感受性の変化、神経内分泌性ストレス表現型、ならびに炎症性疾患モデルにおける病態と関連づけられている。がん研究や代謝研究では、GRシグナルはストレスへの細胞適応、治療応答に関わる経路、組織特異的な転写制御における役割の観点から研究されている。
GR/NR3C1/Glucocorticoid Receptor ダブルニカースプラスミド（m）は、mouse 細胞株における Nr3c1 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、Nr3c1内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、Nr3c1の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。
編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、Nr3c1が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。