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GPT双切口酶质粒(h) | sc-402909-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
GPT双切口酶质粒(h2) | sc-402909-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
人类 GPT 基因编码谷氨酸-丙酮酸转氨酶(丙氨酸氨基转移酶 1,ALT1),这是一种依赖磷酸吡哆醛(PLP)的酶,催化丙氨酸与 α-酮戊二酸之间的可逆转氨反应,生成丙酮酸和谷氨酸。该活性将氨基酸分解代谢与中心碳代谢连接起来,支持糖酵解/糖异生、氮代谢处理,以及通过三羧酸(TCA)循环的补充代谢通量(anaplerotic flux)。在营养压力条件下,GPT 的功能有助于代谢重编程;在氨基酸利用和线粒体氧化还原平衡发生改变的情境中也常被研究,包括代谢功能障碍和癌相关代谢。
GPT 双切酶质粒(h)由一对匹配的质粒组成,专为在 human 细胞系中对 GPT 位点进行高特异性编辑而设计。每个质粒分别表达Cas9 D10A切口酶和针对GPT内不同DNA链的独特sgRNA。当这两种切口酶被引导至相邻但位于DNA链相反侧的位点时,会产生错位的单链切口,从而共同形成错位双链断裂,这需要两个引导RNA在靶位点上协同发挥作用。由此产生的DNA断裂通过内源性细胞修复途径(最常见的是非同源末端连接(NHEJ))得到修复,从而导致插入或缺失,进而破坏GPT的功能。通过要求双sgRNA在靶位点结合,双切口方法提高了编辑特异性,并为需要对靶向精度进行额外控制的应用提供了互补的CRISPR策略。
为高效识别编辑后的细胞,其中一个质粒编码GFP以实现转染细胞群的荧光可视化,而配套质粒则携带嘌呤霉素抗性基因用于抗生素筛选。这些特性共同支持共转染细胞群的高效富集,并简化了GPT基因失活克隆的验证流程。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。