GPRC5B CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-409271

概要

GPRC5B（Gタンパク質共役受容体クラスCグループ5メンバーB）は、細胞表面におけるシグナル統合に関与するとされる、内在性リガンド未同定（オーファン）のGPCR様膜タンパク質です。MAPK/ERK経路およびPI3K-AKT経路の出力調節、受容体トラフィッキング、細胞外刺激に対する転写応答などに関与する役割が報告されています。複数の組織で発現しており、細胞増殖・分化・代謝シグナルの制御、脂肪組織や筋組織におけるインスリン応答性プロセスを含む機能との関連が示されています。複数のモデル系で、GPRC5B発現の変化が炎症性シグナルやがん化に関連する表現型と結び付けられていることから、腫瘍生物学、代謝疾患の機序、免疫関連経路の研究において重要性が示唆されます。膜関連の調節因子として、受容体間クロストーク、細胞内シグナル伝達のダイナミクス、ストレス適応プログラムへの影響という観点でしばしば解析対象となります。

GPRC5B CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるGPRC5B遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、GPRC5B内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、GPRC5Bのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、GPRC5Bタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、GPRC5Bシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、GPRC5B欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• GPRC5Bの機能に不可欠なGPRC5Bエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、GPRC5Bゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• GPRC5B CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびGPRC5B CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、GPRC5B遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  GPRC5B HDRプラスミド（h）および GPRC5B HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはGPRC5Bホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のGPRC5B標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。