Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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GPRC5B Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-409271
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- GPRC5B Il plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) è un pool di plasmidi, ciascuno dei quali codifica la nucleasi Cas9 e un RNA guida (gRNA) specifico per il bersaglio di 20 nt, progettato per la massima efficienza di knockout utilizzando sequenze derivate dalla libreria GeCKO v2
- Le sequenze gRNA indirizzano Cas9 a indurre rotture a doppio filamento (DSB) sito-specifiche nel locus genomico GPRC5B, con conseguente knockout genico tramite giunzione non omologa (NHEJ)
- I geni di resistenza alla puromicina e RFP sono fiancheggiati da siti LoxP, consentendo la rimozione dei marcatori di selezione tramite la ricombinasi Cre (Cre Vector: sc-418923) dopo aver stabilito linee cellulari knockout stabili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: GPRC5B Antibody (A-8): sc-518246
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
GPRC5B Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h) | sc-409271 | 20 µg | $397.00 |
Panoramica
GPRC5B (recettore accoppiato a proteine G di classe C, gruppo 5, membro B) è una proteina di membrana di tipo GPCR-like orfana, implicata nell’integrazione dei segnali alla superficie cellulare, con ruoli riportati nella regolazione degli output delle vie MAPK/ERK e PI3K-AKT, nel trafficking dei recettori e nelle risposte trascrizionali a stimoli extracellulari. È espressa in diversi tessuti ed è stata collegata al controllo della proliferazione cellulare, della differenziazione e della segnalazione metabolica, inclusi processi insulino-responsivi in contesti adiposi e muscolari. Un’alterata espressione di GPRC5B è stata associata a segnalazione infiammatoria e a fenotipi oncogenici in vari sistemi modello, suggerendone la rilevanza per studi di biologia tumorale, dei meccanismi delle malattie metaboliche e delle vie immuno-correlate. In quanto regolatore associato alla membrana, viene frequentemente studiata per il suo impatto sul cross-talk recettoriale, sulla dinamica della segnalazione cellulare e sui programmi di adattamento allo stress.
Il plasmide CRISPR/Cas9 KO GPRC5B (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene GPRC5B in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del GPRC5B insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.
Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto GPRC5B a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina GPRC5B.
Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di GPRC5B per lo studio della segnalazione di GPRC5B, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.
Caratteristiche principali
- sgRNA mirati agli esoni GPRC5B critici per la funzione di GPRC5B
Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di GPRC5B per migliorare l'efficienza del knockout
Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione
Varianti di progettazione
CRISPR +/- HDR
- Gli gRNA codificati dal GPRC5B CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal GPRC5B CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus GPRC5B. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
I costrutti donatori HDR codificati dal GPRC5B Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR GPRC5B (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia GPRC5B per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio GPRC5B definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.