GPRC5B CRISPR Activationプラスミド (h): sc-409271-ACT

GPRC5B（Gタンパク質共役受容体クラスCグループ5メンバーB）は、オーファンGPCR様の膜貫通タンパク質であり、細胞膜およびエンドメンブレン区画における受容体シグナル伝達の調節に関与するとされています。増殖・分化・細胞ストレス応答を形作るMAPK/ERKやPI3K–AKT関連プロセスの制御との関連が報告されており、炎症性シグナルや代謝恒常性に対しては状況依存的な影響を示します。GPRC5Bの発現変動は複数の腫瘍タイプや、免疫・代謝経路の破綻を伴う疾患で報告されており、シグナル統合を研究するためのノードとしての有用性が示唆されています。そのため、GPRC5Bは、がん化シグナルのモデル、脂肪細胞および免疫細胞の生物学、ならびに細胞状態の遷移に影響する受容体間クロストークの解析において、頻繁に検討されています。

GPRC5B CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性GPRC5Bの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

GPRC5B CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における GPRC5B 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はGPRC5B転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性GPRC5Bの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のGPRC5B遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるGPRC5B依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびGPRC5B発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるGPRC5B経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。