GPR56 Lentiviral Ativação Partículas de ativação de lentivirus (h): sc-406370-LAC

ADGRG1 (GPR56) codifica um recetor acoplado à proteína G do tipo adesão, que liga as interações com a matriz extracelular a programas de sinalização intracelular que regulam a adesão celular, a migração e a dinâmica do citoesqueleto. O GPR56 ativa vias de proteína G e de sinalização da família Rho, influenciando a remodelação da actina, a organização das adesões focais e a polaridade celular, e está implicado em processos do neurodesenvolvimento, incluindo o posicionamento neuronal e a organização cortical. No sistema imunitário e no microambiente tumoral, a expressão de ADGRG1 tem sido associada à modulação do comportamento dos leucócitos e de fenótipos invasivos através de sinalização dependente de adesão. Assim, a atividade ou expressão desregulada de GPR56 é relevante para estudos do desenvolvimento cerebral, da comunicação célula–matriz e de alterações na motilidade celular associadas a doenças.

As Partículas de Ativação Lentivirais GPR56 (h) respondem a esta necessidade ao encapsular o sistema completo de ativação transcricional do mediador de ativação sinérgica (SAM) em partículas lentivirais de alto título, prontas para transdução, permitindo uma regulação positiva eficiente de ADGRG1 numa gama mais ampla de tipos de células humanas.

As Partículas de Ativação Lentivirais GPR56 (h) fornecem todos os componentes funcionais do sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) através da transdução lentiviral. O sistema compreende três preparações de partículas co-transduzidas em células-alvo: uma que codifica dCas9 cataliticamente inativo (mutações D10A e N863A) fundido ao domínio de transativação VP64 com um gene de resistência à blasticidina; uma que codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1 com um gene de resistência à higromicina; e uma que codifica um sgRNA de 20 nt específico do alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 com um gene de resistência à puromicina. Após a transdução lentiviral e a integração genómica das cassetes de expressão, os componentes do SAM são expressos de forma estável e reúnem-se no locus-alvo dentro da região promotora proximal a montante do local de início da transcrição ADGRG1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam cooperativamente para recrutar a maquinaria transcricional endógena e impulsionar a regulação positiva sustentada da expressão endógena de GPR56. A utilização de dCas9 inativo em termos de nuclease evita a introdução de quebras de DNA de cadeia dupla e preserva o locus genómico nativo ADGRG1 e a arquitetura reguladora.

O formato lentiviral oferece várias vantagens práticas: a integração genómica estável suporta a ativação hereditária ao longo das divisões celulares; as preparações de partículas de alto título eliminam a necessidade de produção viral interna; e a compatibilidade com tipos de células primárias, não divisíveis e resistentes à transfecção amplia a acessibilidade experimental. A transdução bem-sucedida pode ser confirmada e enriquecida através de seleção tripla com antibióticos utilizando puromicina, higromicina e blasticidina.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.