GPR56 Double Nickaseプラスミド (h): sc-406370-NIC

ADGRG1 は、細胞外マトリックスからの情報を細胞内シグナル伝達へと統合する、神経系および免疫系の系譜で高発現する接着型 G タンパク質共役受容体である GPR56 をコードする。GPR56 は細胞—細胞および細胞—マトリックス間相互作用に関与し、RhoA によるアクチン動態を含む GPCR 連動経路を介して、神経細胞の移動、皮質の発生、細胞骨格の組織化などの過程を調節する。造血系の文脈では、GPR56 は白血球サブセットの接着、トラフィッキング、機能状態の制御に関与すると示唆されており、免疫細胞の局在や活性化プログラムの解明に向けた研究対象となっている。ADGRG1/GPR56 活性の破綻は、神経発達障害や腫瘍細胞の挙動変化と関連づけられており、接着シグナルや系譜特異的分化の機構研究における重要な標的である。

GPR56 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における ADGRG1 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、ADGRG1内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、ADGRG1の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、ADGRG1が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。