GPR50 Double Nickaseプラスミド (h): sc-402934-NIC
- 対象生物種: human
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- GPR50 Double Nickaseプラスミド (h)はペアのプラスミドを含みます。それぞれのプラスミドはD10A変異したCas9 nuclease、及びCRISPR/Cas9 KOの対応よりも高い特異性で遺伝子発現をノックアウトするように設計された標的特異的な20 ntガイドRNA (gRNA)をコードします。
- ペアリングしたガイドRNAは、約20 bpでずらすことにより、ゲノムDNAの特定Cas9媒介のdouble nickingを可能にし、DSBを模造します。
- ペアの1つのプラスミドは選択用のピューロマイシン耐性遺伝子を含みます；ペアのほかの1つのプラスミドは、視覚的にトランスフェクションを確認するGFPマーカーを含みます。
- GPR50ダブルニカースプラスミド（h）およびGPR50ダブルニカースプラスミド（h2）は、GPR50を標的とする異なるペアのgRNA設計をコードしています。いずれか一方、あるいは両方のデザインが利用可能である場合があります
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
GPR50 Double Nickaseプラスミド (h) | sc-402934-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
GPR50 Double Nickaseプラスミド (h2) | sc-402934-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
GPR50は、メラトニン受容体と構造的に近縁である一方、シグナル伝達は非カノニカルとみなされるオーファンGタンパク質共役受容体（GPCR）をコードしており、神経内分泌調節および概日リズム関連の生物学において重要な役割を担います。受容体間相互作用やGPCRのトラフィッキングおよびシグナル伝達能の調節を通じて、メラトニン経路に対する細胞の応答性に影響し、下流のcAMP関連プロセスや転写プログラムに波及します。GPR50の発現パターンや遺伝的多型は、代謝表現型や神経精神医学的形質と関連づけられており、エネルギーバランス、気分調節、視床下部機能の研究における重要性を支持しています。組織偏在的な発現を示す膜受容体として、GPR50はヒト細胞モデルにおけるGPCRネットワークのクロストークや、文脈依存的なシグナル出力を解析するうえでも有用です。
GPR50 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における GPR50 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、GPR50内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、GPR50の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。
編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、GPR50が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。