GPR40 Double Nickaseプラスミド (m): sc-433245-NIC
- 対象生物種: mouse
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- GPR40 Double Nickaseプラスミド (m)はペアのプラスミドを含みます。それぞれのプラスミドはD10A変異したCas9 nuclease、及びCRISPR/Cas9 KOの対応よりも高い特異性で遺伝子発現をノックアウトするように設計された標的特異的な20 ntガイドRNA (gRNA)をコードします。
- ペアリングしたガイドRNAは、約20 bpでずらすことにより、ゲノムDNAの特定Cas9媒介のdouble nickingを可能にし、DSBを模造します。
- ペアの1つのプラスミドは選択用のピューロマイシン耐性遺伝子を含みます；ペアのほかの1つのプラスミドは、視覚的にトランスフェクションを確認するGFPマーカーを含みます。
- GPR40ダブルニカースプラスミド（m）およびGPR40ダブルニカースプラスミド（m2）は、Ffar1を標的とする異なるペアのgRNA設計をコードしています。いずれか一方、あるいは両方のデザインが利用可能である場合があります
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
GPR40 Double Nickaseプラスミド (m) | sc-433245-NIC | 20 µg | $410.00 |
マウスのFfar1は、GPR40をコードしている。GPR40は中鎖および長鎖の遊離脂肪酸によって活性化されるGタンパク質共役受容体であり、栄養素の感知を細胞内シグナル伝達へと結び付ける。膵島やその他の代謝組織では、GPR40は主としてGq/11に共役し、ホスホリパーゼCを活性化して細胞内Ca²⁺濃度を上昇させ、MAPK経路を作動させることで、刺激—分泌連関や、脂質応答性のより広範な転写プログラムの形成に関与する。この受容体は脂肪酸依存的な糖恒常性の制御に関わり、代謝ストレス、脂肪毒性、炎症に関与するとされる経路とも交差する。FFAR1/GPR40シグナルの変化は、肥満に伴うインスリン調節異常や関連する代謝表現型との関連で、マウスモデルを用いて研究されてきた。
GPR40 ダブルニカースプラスミド（m）は、mouse 細胞株における Ffar1 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、Ffar1内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、Ffar1の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。
編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、Ffar1が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。