GPR40 Double Nickaseプラスミド (h): sc-401434-NIC
- 対象生物種: human
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- GPR40 Double Nickaseプラスミド (h)はペアのプラスミドを含みます。それぞれのプラスミドはD10A変異したCas9 nuclease、及びCRISPR/Cas9 KOの対応よりも高い特異性で遺伝子発現をノックアウトするように設計された標的特異的な20 ntガイドRNA (gRNA)をコードします。
- ペアリングしたガイドRNAは、約20 bpでずらすことにより、ゲノムDNAの特定Cas9媒介のdouble nickingを可能にし、DSBを模造します。
- ペアの1つのプラスミドは選択用のピューロマイシン耐性遺伝子を含みます；ペアのほかの1つのプラスミドは、視覚的にトランスフェクションを確認するGFPマーカーを含みます。
- GPR40ダブルニカースプラスミド（h）およびGPR40ダブルニカースプラスミド（h2）は、FFAR1を標的とする異なるペアのgRNA設計をコードしています。いずれか一方、あるいは両方のデザインが利用可能である場合があります
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
GPR40 Double Nickaseプラスミド (h) | sc-401434-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
GPR40 Double Nickaseプラスミド (h2) | sc-401434-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
FFAR1はGPR40をコードしており、GPR40は中鎖および長鎖の遊離脂肪酸に高い応答性を示す、脂質感知型のクラスA GPCRです。活性化されると、GPR40は主にGαq/11に共役してホスホリパーゼC（PLC）シグナル伝達を促進し、細胞内Ca2+濃度を上昇させ、刺激—分泌連関やより広範な代謝シグナル伝達ネットワークを調節するPKC依存性経路を作動させます。ヒト組織においてFFAR1活性は、栄養に駆動される内分泌および代謝恒常性の調節と密接に関連しており、β細胞機能、インスリン分泌動態、脂質誘導性のシグナル適応などとの研究上の関連が示されています。脂肪酸感知の破綻および下流のCa2+依存性シグナル伝達の異常は、2型糖尿病や肥満に伴うインスリン抵抗性を含む代謝疾患の機序、ならびに炎症に関連した代謝リモデリングの文脈で研究されています。
GPR40 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における FFAR1 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、FFAR1内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、FFAR1の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。
編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、FFAR1が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。