GPR30CRISPR激活质粒(h): sc-402502-ACT

GPER1 编码 GPR30（GPER），这是一种膜相关的雌激素受体，介导快速的非基因组雌激素信号，并与经典的雌激素应答型转录程序相整合。GPR30 的激活可启动 cAMP/PKA、EGFR 反式激活、MAPK/ERK、PI3K/AKT 以及细胞内 Ca²⁺ 通量等通路，从而以细胞类型依赖的方式影响增殖、迁移、代谢和炎症信号。GPER1/GPR30 信号失调与激素反应性肿瘤、心血管与代谢功能障碍以及神经炎症过程有关，因此是解析雌激素驱动的通路串扰的一个重要节点。作为与生物标志物相关的信号受体，GPR30 常被用于研究其对细胞状态转变、受体转运以及应激反应基因网络的影响。

GPR30 CRISPR激活质粒（h）提供了一种靶向、非破坏性的方法，可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性GPER1的表达。

GPR30 CRISPR激活质粒（h）是一个由三条质粒组成的协同激活介导（SAM）系统，旨在对人类细胞系中的GPER1基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变（D10A 和 N863A）的无催化活性的 Cas9（dCas9）为核心，这些突变消除了核酸酶活性，同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合，并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用，并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA，其与两个MS2 RNA适配体融合，这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点，并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送，以确保系统所有组分的平衡表达。

在靶位点组装完成后，SAM复合物结合于GPER1转录起始位点上游约200 bp处，VP64、p65和HSF1在此协同作用，招募转录 machinery并驱动内源性GPR30表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同， dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列，从而保留了原生的GPER1位点，并能够研究内源性位点上依赖于GPR30的转录反应，使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在GPER1表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟GPR30通路恢复的宝贵工具。

仅供研究使用。不用于诊断或治疗。