GPR20 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-407471-ACT

GPR20は、主に神経および神経内分泌系の生物学と関連づけられている、オーファンのクラスA Gタンパク質共役受容体（GPCR）をコードします。GPR20は、受容体を介したシグナル伝達を形成し、cAMP動態、MAPK活性、ならびに下流の転写プログラムに影響を及ぼすと考えられています。膜貫通型のGPCRとして、GPR20は細胞間コミュニケーションや刺激応答性のシグナル伝達ネットワークを調節し、関連する細胞環境における分化、興奮性、分泌過程を協調させる可能性があります。GPCRシグナルの変調は、神経精神疾患および代謝表現型に広く関与するとされており、GPR20は経路間の結び付きや受容体駆動性の制御状態を解析するうえで有用な標的となります。そのためヒトGPR20は、GPCR関連シグナル伝達の機構研究や、疾患関連モデル系における遺伝子ネットワークへの影響のマッピングにおいて関心が持たれています。

GPR20 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性GPR20の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

GPR20 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における GPR20 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はGPR20転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性GPR20の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のGPR20遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるGPR20依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびGPR20発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるGPR20経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。