GPR19 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-407000-ACT

GPR19はオーファンGタンパク質共役受容体（GPCR）をコードしており、複数の組織で発現し、転写プログラム、分化状態、ストレス応答性の生理機能を形作る細胞内シグナル伝達ネットワークの調節に関与することが示唆されています。膜受容体であるGPR19は、cAMP/PKAやMAPKシグナル伝達などのGPCR関連経路に影響を与えうる位置づけにあり、下流で遺伝子発現や細胞恒常性に作用します。GPCRシグナルの変化は、代謝調節、神経生物学、免疫調節に広く関係しており、GPR19の発現変動は炎症やがん関連表現型などの文脈で研究されています。内在性GPR19の量を操作することは、ヒト細胞モデルにおける受容体駆動のシグナル伝達ダイナミクスや経路間クロストークの機構的解析を支援します。

GPR19 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性GPR19の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

GPR19 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における GPR19 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はGPR19転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性GPR19の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のGPR19遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるGPR19依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびGPR19発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるGPR19経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。