Plásmido CRISPR de Activación (h) GPR171: sc-412047-ACT

GPR171 codifica un receptor huérfano de clase A acoplado a proteína G (GPCR) enriquecido en el sistema nervioso central e implicado en la señalización neuromoduladora. Como GPCR, se espera que se acople a proteínas G heterotriméricas para influir en vías de segundos mensajeros como la señalización cAMP/PKA y MAPK, modelando así la excitabilidad neuronal y la transmisión sináptica. Se han descrito asociaciones que vinculan alteraciones en la señalización de GPR171 con fenotipos neuroconductuales y con vías relevantes para la recompensa, la respuesta al estrés y la conducta alimentaria. Estas características hacen de GPR171 un objetivo útil para estudiar la regulación de los GPCR, el tráfico del receptor y los programas transcripcionales aguas abajo en contextos neuronales y neuroendocrinos.

GPR171 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de GPR171 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

GPR171 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus GPR171 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional GPR171, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de GPR171. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo GPR171 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de GPR171 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía GPR171 en células tumorales con expresión de GPR171 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.