GPR119 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-403135-ACT

GPR119 はクラスAの G タンパク質共役受容体（GPCR）をコードしており、膵島細胞および腸管の腸内分泌系細胞集団に多く発現しています。これらの細胞において、GPR119 は内因性脂肪酸誘導体を感知する脂質センサー受容体として機能します。活性化されると、GPR119 は主に Gs と共役して細胞内 cAMP を増加させ、PKA および EPAC に連動したシグナル伝達を介して、刺激‐分泌連関や細胞の代謝応答を調節します。この受容体は、栄養素誘導性シグナル伝達、インクレチンに関連する内分泌コミュニケーション、ならびに cAMP 依存的な転写プログラムという観点から研究されています。GPR119 に関わる GPCR および cAMP シグナルの異常は、糖代謝恒常性やエネルギーバランスに関連する経路を含む代謝疾患の病態生物学において検討されています。

GPR119 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性GPR119の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

GPR119 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における GPR119 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はGPR119転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性GPR119の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のGPR119遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるGPR119依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびGPR119発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるGPR119経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。