GPNMB CRISPR Activationプラスミド (h): sc-402966-ACT

GPNMB（glycoprotein non-metastatic melanoma protein B）はI型膜貫通型糖タンパク質で、骨髄系細胞系譜やメラノサイト系の細胞集団で高発現しており、細胞接着、遊走、組織リモデリングに寄与します。リソソームおよびエンドソームに関連するプロセスに関与することが示唆されており、細胞外マトリックスや免疫制御因子との相互作用を介して、炎症シグナルや抗原提示細胞の機能を調節し得ます。GPNMBの発現変動は、メラノーマの生物学、神経炎症、線維化、腫瘍―免疫微小環境の再構築など多様な文脈で報告されており、ストレス適応や細胞分化プログラムの研究において、有用なマーカーであると同時に機構上の重要な結節点ともなっています。in vitroでは、GPNMBの制御はしばしば、マクロファージの極性化、破骨細胞活性、上皮―間葉系様表現型を制御する経路と併せて解析されます。

GPNMB CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性GPNMBの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

GPNMB CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における GPNMB 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はGPNMB転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性GPNMBの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のGPNMB遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるGPNMB依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびGPNMB発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるGPNMB経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。