GPIHBP1 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-403473-ACT

GPIHBP1（glycosylphosphatidylinositol anchored high density lipoprotein binding protein 1）は、内皮細胞表面に存在するGPIアンカー型タンパク質で、リポタンパクリパーゼ（LPL）を捕捉して毛細血管腔へ輸送し、血管内におけるトリグリセリド（中性脂肪）に富むリポタンパク質の加水分解を可能にします。GPIHBP1はLPLへの結合、およびカイロミクロンやVLDLとの相互作用を介して、脂肪分解（リポリシス）経路と血漿トリグリセリドのクリアランス調節の中心的役割を担います。GPIHBP1の発現や機能が変化するとLPLの局在と活性が乱れ、高トリグリセリド血症や脂質処理異常を特徴とする脂質異常症の表現型に寄与します。そのため本遺伝子は、血管の脂質代謝、内皮細胞生物学、ならびにリポタンパク質プロセシングを制御する機構の研究において広く解析されています。

GPIHBP1 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性GPIHBP1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

GPIHBP1 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における GPIHBP1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はGPIHBP1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性GPIHBP1の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のGPIHBP1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるGPIHBP1依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびGPIHBP1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるGPIHBP1経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。