GP78 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-402346-ACT

AMFRはヒトGP78（自己分泌性運動因子受容体）をコードしており、GP78は小胞体膜にアンカーされたE3ユビキチンリガーゼである。GP78は、誤って折りたたまれたタンパク質をユビキチン化してプロテアソーム分解へ導くことで、小胞体関連分解（ERAD）の中核因子として機能する。GP78は小胞体シャペロンやE2酵素と協調し、タンパク質品質管理、ERストレス応答、ならびに一部の代謝・シグナル制御因子のターンオーバーを調節する。ユビキチン依存的なプロテオスタシスと膜関連シグナル伝達における役割を通じて、AMFR/GP78の活性は、増殖、遊走、炎症性ストレスシグナルに影響する細胞の適応プログラムと関連づけられている。GP78が関与するERADおよびユビキチンリガーゼ・ネットワークの破綻は、プロテオスタシスの不均衡が一因となるがん生物学、神経変性、代謝疾患モデルなどの文脈で研究されてきた。

GP78 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性AMFRの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

GP78 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における AMFR 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はAMFR転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性GP78の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のAMFR遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるGP78依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびAMFR発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるGP78経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。