Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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golgin 97 Double Nickaseプラスミド (h): sc-403152-NIC
- 対象生物種: human
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- golgin 97 Double Nickaseプラスミド (h)はペアのプラスミドを含みます。それぞれのプラスミドはD10A変異したCas9 nuclease、及びCRISPR/Cas9 KOの対応よりも高い特異性で遺伝子発現をノックアウトするように設計された標的特異的な20 ntガイドRNA (gRNA)をコードします。
- ペアリングしたガイドRNAは、約20 bpでずらすことにより、ゲノムDNAの特定Cas9媒介のdouble nickingを可能にし、DSBを模造します。
- ペアの1つのプラスミドは選択用のピューロマイシン耐性遺伝子を含みます；ペアのほかの1つのプラスミドは、視覚的にトランスフェクションを確認するGFPマーカーを含みます。
- golgin 97ダブルニカースプラスミド（h）およびgolgin 97ダブルニカースプラスミド（h2）は、GOLGA1を標的とする異なるペアのgRNA設計をコードしています。いずれか一方、あるいは両方のデザインが利用可能である場合があります
- トランスフェクションの後、遺伝子ノックアウト効果は、抗体を用いたWB、IFまたはIHCによって検定されることができます: golgin 97 抗体 (CDFX): sc-59820
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
golgin 97 Double Nickaseプラスミド (h) | sc-403152-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
golgin 97 Double Nickaseプラスミド (h2) | sc-403152-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
GOLGA1は、トランスゴルジネットワーク（TGN）に局在するコイルドコイル型のゴルジンであるゴルジン97をコードしており、小胞係留因子としてエンドソームからゴルジへの逆行性輸送およびゴルジ膜の構造・配置の調整に機能します。ゴルジン97は小型GTPアーゼや係留因子との相互作用を介して、ソーティングの忠実性、カーゴのリサイクリング、ならびに分泌と膜タンパク質恒常性を支える極性輸送の維持に寄与します。ゴルジでの係留や逆行性輸送の破綻は、一般に細胞ストレス応答、受容体シグナル伝達の変化、タンパク質プロセシングの異常と幅広く関連しています。エンドメンブレン輸送ネットワークの構成要素として、ゴルジン97はゴルジの完全性、オルガネラ動態、そして神経変性、感染生物学、がん細胞生物学に関連する輸送依存的表現型の研究で頻繁に解析されています。
golgin 97 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における GOLGA1 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、GOLGA1内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、GOLGA1の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。
編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、GOLGA1が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。