golgin 245 Double Nickaseプラスミド (h): sc-404412-NIC

GOLGA4は、ゴルジリボンの構築と、分泌経路における効率的なカーゴ仕分けに必要な小胞のテザリングに寄与する、コイルドコイル構造をもつゴルジマトリックスタンパク質ゴルジン245をコードする。ゴルジン245は、ゴルジ体とエンドソーム区画間の逆行性および順行性輸送を協調させる膜輸送過程に関与し、糖鎖付加酵素の適切な分布とゴルジ構造の維持を支える。ゴルジのテザリングおよび輸送ネットワークの破綻は、細胞極性の変化、ストレスシグナル伝達、タンパク質プロセシングの欠陥と関連し、これらはがんや神経変性疾患の文脈でしばしば観察される。ゴルジ動態のマーカー兼制御因子として、ゴルジン245はヒト細胞におけるオルガネラ構造、小胞輸送、ならびにプロテオスタシス関連経路の解析に広く用いられている。

golgin 245 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における GOLGA4 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、GOLGA4内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、GOLGA4の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、GOLGA4が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。