GnT-IVA CRISPR Activationプラスミド (h): sc-407146-ACT

ヒトのMGAT4Aは、N-アセチルグルコサミニルトランスフェラーゼIVa（GnT-IVA）をコードしており、複合型N型糖鎖にβ1,4結合のN-アセチルグルコサミン分岐を付加するゴルジ体局在の糖転移酵素である。この酵素反応は、タンパク質のフォールディングや細胞内輸送、細胞表面での受容体の滞留、ならびに下流のシグナル伝達ダイナミクスを調節し得るN型糖鎖の分岐形成に寄与する。MGAT4A依存的な糖鎖付加は、細胞—細胞間相互作用、栄養感知、膜受容体制御に影響を与えるより広範な糖鎖生合成ネットワークとも連関している。MGAT4Aが関与するN型糖鎖付加の破綻や分岐パターンの変化は、代謝異常やがん関連の糖鎖表現型（グライコフェノタイプ）という文脈で研究されており、機序解明のための経路研究やバイオマーカー探索研究における標的としての有用性が示唆されている。

GnT-IVA CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性MGAT4Aの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

GnT-IVA CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における MGAT4A 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はMGAT4A転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性GnT-IVAの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のMGAT4A遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるGnT-IVA依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびMGAT4A発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるGnT-IVA経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。