GnRH I CRISPR Activationプラスミド (m): sc-420625-ACT

マウスのGnrh1は、視床下部由来の神経ペプチドであるゴナドトロピン放出ホルモンI（GnRH I）をコードしており、下垂体のゴナドトロフを刺激して黄体形成ホルモン（LH）および卵胞刺激ホルモン（FSH）の分泌を促進することで、生殖内分泌機能を統括します。パルス状のGnRH Iシグナルは、GnRH受容体依存的なGq/11経路を介して作用し、PLCβの活性化、細胞内Ca2+動員、PKC/MAPKカスケード、ならびにゴナドトロピンの合成・放出を調節する転写プログラムを駆動します。キスペプチン、性ステロイドによるフィードバック、概日・代謝入力との統合を通じて、Gnrh1は思春期の発来時期、受胎能、周期的な生殖生理に寄与します。GnRH Iの産生またはシグナル伝達の異常は、低ゴナドトロピン性性腺機能低下症、思春期異常、ならびに生殖軸の恒常性に影響する神経内分泌の攪乱に関する実験モデルと関連します。

GnRH I CRISPR活性化プラスミド（m）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性Gnrh1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

GnRH I CRISPR 活性化プラスミド (m) は、ヒト細胞株における Gnrh1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はGnrh1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性GnRH Iの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のGnrh1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるGnRH I依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびGnrh1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるGnRH I経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。