GnRH I CRISPR Activationプラスミド (h): sc-401425-ACT

GNRH1は、視床下部で産生される10アミノ酸ペプチドであるゴナドトロピン放出ホルモンI（GnRH I）をコードしている。GnRH Iは下垂体前葉のゴナドトロフを刺激し、黄体形成ホルモン（LH）および卵胞刺激ホルモン（FSH）の分泌を促すことで、生殖内分泌シグナル伝達を開始する。GnRH Iはプレプロホルモンとして合成された後、調節性分泌経路を介してプロセシングされ、パルス状に放出されることで視床下部―下垂体―性腺（HPG）軸の機能、性成熟、ならびに生殖能を協調的に制御する。GnRH受容体の活性化は、Gq/11を介したホスホリパーゼCシグナル伝達を引き起こし、下流のIP3/DAG産生、カルシウム動員、各種プロテインキナーゼ経路を通じて、ゴナドトロピン遺伝子の転写および分泌ダイナミクスを制御する。GnRH Iシグナルの破綻は思春期発来の異常や低ゴナドトロピン性の状態に関与するとされ、神経内分泌調節、生殖生物学、ならびにホルモン依存性疾患モデルの分野で頻繁に研究されている。

GnRH I CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性GNRH1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

GnRH I CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における GNRH1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はGNRH1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性GnRH Iの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のGNRH1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるGnRH I依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびGNRH1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるGnRH I経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。