GNPDA2 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-417433-ACT

ヒトGNPDA2（グルコサミン-6-リン酸デアミナーゼ2）は、細胞質に存在する酵素をコードしており、グルコサミン-6-リン酸をフルクトース-6-リン酸とアンモニアへ可逆的に変換する反応を触媒します。これにより、ヘキソサミン生合成経路が中心的な解糖系フラックスと結び付けられます。GNPDA2は、タンパク質のN結合型およびO結合型糖鎖修飾に用いられるUDP-GlcNAcの利用可能量を調節することで、糖鎖を介した制御に依存する栄養感知、プロテオスタシス、ならびにシグナル伝達過程に影響を及ぼし得ます。遺伝学的・機能的研究により、GNPDA2は体格指数（BMI）や肥満リスクなどの代謝表現型と関連付けられており、エネルギーホメオスタシスやインスリン応答性代謝を司る経路との関係が示唆されています。これらの特徴から、GNPDA2は、ヘキソサミン経路の動態がヒトモデル系における細胞増殖、ストレス応答、代謝の再配線にどのように影響するかを検討するための有用な標的となります。

GNPDA2 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性GNPDA2の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

GNPDA2 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における GNPDA2 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はGNPDA2転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性GNPDA2の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のGNPDA2遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるGNPDA2依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびGNPDA2発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるGNPDA2経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。