GMD Double Nickaseプラスミド (h): sc-410794-NIC
- 対象生物種: human
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- GMD Double Nickaseプラスミド (h)はペアのプラスミドを含みます。それぞれのプラスミドはD10A変異したCas9 nuclease、及びCRISPR/Cas9 KOの対応よりも高い特異性で遺伝子発現をノックアウトするように設計された標的特異的な20 ntガイドRNA (gRNA)をコードします。
- ペアリングしたガイドRNAは、約20 bpでずらすことにより、ゲノムDNAの特定Cas9媒介のdouble nickingを可能にし、DSBを模造します。
- ペアの1つのプラスミドは選択用のピューロマイシン耐性遺伝子を含みます；ペアのほかの1つのプラスミドは、視覚的にトランスフェクションを確認するGFPマーカーを含みます。
- GMDダブルニカースプラスミド（h）およびGMDダブルニカースプラスミド（h2）は、GMDSを標的とする異なるペアのgRNA設計をコードしています。いずれか一方、あるいは両方のデザインが利用可能である場合があります
- トランスフェクションの後、遺伝子ノックアウト効果は、抗体を用いたWB、IFまたはIHCによって検定されることができます: GMD 抗体 (C-7): sc-515226
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
GMD Double Nickaseプラスミド (h) | sc-410794-NIC | 20 µg | $410.00 |
ヒトのGMDSは、GDP-マンノースからde novoでGDP‑L‑フコースを生合成する経路における最初の律速（コミット）段階を触媒する細胞質酵素、GDP-マンノース4,6-デヒドラターゼ（GMD）をコードしている。この経路は、糖タンパク質や糖脂質上のフコース化糖鎖を生成するフコース転移酵素反応の基質となるGDP‑フコースを供給し、糖鎖–レクチン相互作用の調節を介して、細胞表面受容体シグナル伝達、白血球の接着、およびトラフィッキングに影響を与える。GMDS活性は、セレクチンリガンドの形成や、増殖、免疫認識、ストレス応答に影響し得るより広範な糖タンパク質成熟など、ゴルジ体を介した糖鎖付加プログラムにも関与する。GMDSの機能異常に伴うフコース化の変化は、がん生物学や免疫学における疾患関連表現型と関連づけられており、GMDSは糖鎖依存的な細胞間コミュニケーションの制御を研究するうえで有用な結節点となる。
GMD ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における GMDS 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、GMDS内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、GMDSの機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。
編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、GMDSが破壊されたクローンの検証が簡素化されます。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。