Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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GM2/GD2 Synthase Double Nickaseプラスミド (h): sc-403592-NIC
- 対象生物種: human
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- GM2/GD2 Synthase Double Nickaseプラスミド (h)はペアのプラスミドを含みます。それぞれのプラスミドはD10A変異したCas9 nuclease、及びCRISPR/Cas9 KOの対応よりも高い特異性で遺伝子発現をノックアウトするように設計された標的特異的な20 ntガイドRNA (gRNA)をコードします。
- ペアリングしたガイドRNAは、約20 bpでずらすことにより、ゲノムDNAの特定Cas9媒介のdouble nickingを可能にし、DSBを模造します。
- ペアの1つのプラスミドは選択用のピューロマイシン耐性遺伝子を含みます；ペアのほかの1つのプラスミドは、視覚的にトランスフェクションを確認するGFPマーカーを含みます。
- GM2/GD2 Synthaseダブルニカースプラスミド（h）およびGM2/GD2 Synthaseダブルニカースプラスミド（h2）は、B4GALNT1を標的とする異なるペアのgRNA設計をコードしています。いずれか一方、あるいは両方のデザインが利用可能である場合があります
- トランスフェクションの後、遺伝子ノックアウト効果は、抗体を用いたWB、IFまたはIHCによって検定されることができます: GM2/GD2 Synthase 抗体 (C-5): sc-376505
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
GM2/GD2 Synthase Double Nickaseプラスミド (h) | sc-403592-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
GM2/GD2 Synthase Double Nickaseプラスミド (h2) | sc-403592-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
B4GALNT1はGM2/GD2シンターゼをコードしており、ゴルジ体に局在するβ1,4-N-アセチルガラクトサミニルトランスフェラーゼとして、ラクトシルセラミド由来のガングリオシドをGM2およびGD2へ変換する反応を触媒し、形質膜上の糖スフィンゴ脂質組成を規定します。ガングリオシド生合成を制御することで、この酵素は膜マイクロドメインの組織化、受容体シグナル伝達、細胞間相互作用に影響を及ぼし、糖鎖修飾状態を、接着やシグナル伝達を制御する経路と結び付けます。ガングリオシドプロファイルおよびB4GALNT1活性の変化は、神経発生や神経変性様の表現型の変化と関連づけられており、糖スフィンゴ脂質のリモデリングが細胞の同一性やストレス応答に影響する文脈で、しばしば検討されます。糖脂質代謝の結節点となる酵素として、B4GALNT1は、糖鎖構造がタンパク質輸送、免疫認識、細胞表面抗原提示をどのように調節するかを解明するための有用な標的です。
GM2/GD2 Synthase ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における B4GALNT1 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、B4GALNT1内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、B4GALNT1の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。
編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、B4GALNT1が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。