glypican-4 Double Nickaseプラスミド (h): sc-405200-NIC

ヒトのGPC4は、細胞表面に局在し、細胞外リガンドの提示を調節するグリコシルホスファチジルイノシトール（GPI）アンカー型ヘパラン硫酸プロテオグリカンであるグリピカン4をコードします。グリピカン4は、成長因子、モルフォゲン、細胞外マトリックス成分に結合することで、受容体型チロシンキナーゼ（RTK）シグナル伝達や、Wnt/β-カテニン経路、Hedgehog経路などの発生関連経路に影響を及ぼし、細胞増殖、分化、組織パターニングを形作ります。GPC4の機能は、神経発生、シナプス関連プロセス、ならびに脂肪組織やインスリン応答性のシグナルネットワークを介した代謝調節などの文脈で研究されてきました。GPC4の発現や制御の変化は複数の疾患関連研究領域で報告されており、異常なシグナル伝達や細胞間コミュニケーションを解析するための標的として有用であることが示唆されています。

glypican-4 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における GPC4 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、GPC4内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、GPC4の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、GPC4が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。