Glyoxalase I CRISPR Activationプラスミド (h): sc-401914-ACT

ヒトGLO1は、亜鉛依存性のメタロ酵素であるグリオキサラーゼIをコードしており、グリオキサラーゼ系の最初の反応かつ律速段階を触媒する。すなわち、解糖系の細胞毒性副産物であるメチルグリオキサール（グルタチオンとヘミチオアセタールを形成した形）をS‑D‑ラクトイルグルタチオンへと変換する。メチルグリオキサール濃度を制御することで、GLO1はタンパク質や核酸の非酵素的糖化を抑え、終末糖化産物（AGEs）の生成を低減し、その結果としてレドックス恒常性や細胞ストレス応答に影響を与える。GLO1活性は、代謝リプログラミングや解毒能とも関連しており、これらは酸化ストレス、炎症、糖代謝異常のモデルにおいてしばしば解析対象となる。メチルグリオキサールのクリアランス異常や糖化負荷の増大は、インスリン抵抗性、血管機能障害、腫瘍細胞のストレス耐性などの疾患関連表現型と関係しており、GLO1は代謝およびプロテオスタシス研究における機能的ハブとして利用されている。

Glyoxalase I CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性GLO1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

Glyoxalase I CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における GLO1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はGLO1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性Glyoxalase Iの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のGLO1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるGlyoxalase I依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびGLO1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるGlyoxalase I経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。