Glycophorin C Double Nickaseプラスミド (h): sc-405123-NIC
- 対象生物種: human
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- Glycophorin C Double Nickaseプラスミド (h)はペアのプラスミドを含みます。それぞれのプラスミドはD10A変異したCas9 nuclease、及びCRISPR/Cas9 KOの対応よりも高い特異性で遺伝子発現をノックアウトするように設計された標的特異的な20 ntガイドRNA (gRNA)をコードします。
- ペアリングしたガイドRNAは、約20 bpでずらすことにより、ゲノムDNAの特定Cas9媒介のdouble nickingを可能にし、DSBを模造します。
- ペアの1つのプラスミドは選択用のピューロマイシン耐性遺伝子を含みます；ペアのほかの1つのプラスミドは、視覚的にトランスフェクションを確認するGFPマーカーを含みます。
- Glycophorin Cダブルニカースプラスミド（h）およびGlycophorin Cダブルニカースプラスミド（h2）は、GYPCを標的とする異なるペアのgRNA設計をコードしています。いずれか一方、あるいは両方のデザインが利用可能である場合があります
- トランスフェクションの後、遺伝子ノックアウト効果は、抗体を用いたWB、IFまたはIHCによって検定されることができます: Glycophorin C/D 抗体 (F-8): sc-365599
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
Glycophorin C Double Nickaseプラスミド (h) | sc-405123-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Glycophorin C Double Nickaseプラスミド (h2) | sc-405123-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
GYPCは、ヒト赤血球膜の主要なシアル化糖タンパク質であるグリコフォリンCをコードしており、高度に糖鎖修飾された細胞外ドメインを介して膜の安定性と表面電荷の維持に寄与します。グリコフォリンCは膜―細胞骨格ネットワークと結び付き、タンパク質4.1Rに関連する相互作用などを含めて、せん断応力下での赤血球の変形能を支えます。GYPCの変異や欠損は赤血球の機械的特性や抗原提示を変化させ得るため、遺伝性赤血球膜異常症や血液型の生物学に関する研究において重要です。赤血球表面の主要な決定因子として、グリコフォリンCはまた、糖タンパク質の輸送、膜構造の組織化、そして赤血球界面における宿主―病原体相互作用を調べるためのモデルとしても用いられます。
Glycophorin C ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における GYPC 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、GYPC内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、GYPCの機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。
編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、GYPCが破壊されたクローンの検証が簡素化されます。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。