glycogen synthase 2 Plasmide Double Nickase (h): sc-402704-NIC

GYS2 codifica la glicogeno sintasi 2 umana, l’isoforma predominante responsabile dell’allungamento delle catene di glicogeno negli epatociti, trasferendo glucosio dall’UDP-glucosio ai primer di glicogeno preesistenti. La sua attività integra i segnali di insulina e nutrienti tramite una regolazione dipendente dalla fosforilazione, coordinando l’accumulo di glicogeno epatico con la disponibilità sistemica di glucosio. GYS2 opera all’interno delle vie del metabolismo dei carboidrati che bilanciano glicogenesi e glicogenolisi ed è strettamente collegata all’omeostasi del glucosio durante i cicli di alimentazione e digiuno. La disregolazione della sintesi di glicogeno dipendente da GYS2 è rilevante per fenotipi metabolici che comportano un accumulo o una deplezione anomali di glicogeno epatico ed è frequentemente analizzata nel contesto della resistenza all’insulina e di meccanismi più ampi di malattia metabolica.

glycogen synthase 2 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus GYS2 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di GYS2. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di GYS2. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con GYS2 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.