Partículas Lentivirales de Activación (h) Glucose Transporter Glut5: sc-401907-LAC

SLC2A5 codifica el transportador facilitativo de hexosas GLUT5, un transportador de fructosa de alta afinidad localizado principalmente en la membrana plasmática de células epiteliales absortivas y otros tejidos metabólicamente activos. Al mediar la captación de fructosa, GLUT5 favorece la entrada de carbono a la célula hacia la glucólisis y la lipogénesis y se integra con vías de detección de nutrientes y de reprogramación metabólica. La alteración de la expresión de SLC2A5 se ha asociado con cambios en el manejo de la fructosa, en las respuestas al estrés oxidativo e inflamatorio, y con fenotipos metabólicos específicos de tejido relevantes para trastornos del metabolismo de carbohidratos y para la utilización de nutrientes por células tumorales. Como transportador de la familia de carriers de solutos, GLUT5 también se utiliza como modelo para estudiar la cinética del transporte de membrana, la selectividad por sustrato y su regulación por señales dietarias y hormonales.

Las partículas de activación lentiviral Glucose Transporter Glut5 (h) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de SLC2A5 en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral Glucose Transporter Glut5 (h) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción SLC2A5, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de Glucose Transporter Glut5. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo SLC2A5 y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.