Glucagon Receptor CRISPR Activationプラスミド (h): sc-402018-ACT

GCGRはヒトのグルカゴン受容体をコードしており、グルカゴンに結合するクラスBのGタンパク質共役受容体（GPCR）である。主にGαsと共役してアデニル酸シクラーゼを刺激し、cAMPを増加させ、PKA依存性の転写プログラムを活性化する。このシグナル伝達軸は、肝臓での糖新生、グリコーゲン分解、脂質代謝を制御し、さらにCREB介在性の遺伝子発現、代謝ストレス応答、エネルギーホメオスタシスの内分泌的制御とも交差する。GCGRの発現量やシグナル伝達の変化は、糖および脂質の取り扱い異常に関与するとされ、代謝疾患の生物学的背景の文脈でしばしば研究されている。明確な下流リードアウトをもつ膜受容体として、GCGRは肝細胞などの関連細胞種におけるホルモン駆動性経路を解析するうえで扱いやすい標的ノードとなる。

Glucagon Receptor CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性GCGRの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

Glucagon Receptor CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における GCGR 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はGCGR転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性Glucagon Receptorの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のGCGR遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるGlucagon Receptor依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびGCGR発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるGlucagon Receptor経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。