GLT6D1 CRISPR Activationプラスミド (h2): sc-415678-ACT-2

ヒトGLT6D1（glycosyltransferase 6 domain containing 1）は、糖鎖複合体の生合成およびリモデリングに関与すると考えられるゴルジ体局在性の糖転移酵素（推定）をコードしており、その結果としてタンパク質の糖鎖修飾や細胞表面の糖鎖組成に影響を及ぼす可能性がある。糖鎖の成熟過程への作用を通じて、GLT6D1は、特定の糖鎖パターンに依存する分泌経路における輸送、細胞外マトリックスとの相互作用、ならびに受容体介在性シグナル伝達過程を調節し得る位置づけにある。ヒトを対象とした研究では、GLT6D1の遺伝的多型や発現制御の変化が歯周病の感受性と関連づけられており、口腔内における宿主—微生物相互作用や炎症性の組織リモデリングとの関連性が示唆される。さらに、GLT6D1の遺伝子編集や機能ゲノミクス手法を用いることで、疾患関連の細胞モデルにおける細胞接着、免疫関連シグナル、糖タンパク質プロテオーム（グライコプロテオーム）プロファイルの変化など、糖鎖修飾依存的な表現型の解析が可能となる。

GLT6D1 CRISPR活性化プラスミド（h2）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性GLT6D1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

GLT6D1 CRISPR 活性化プラスミド (h2) は、ヒト細胞株における GLT6D1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はGLT6D1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性GLT6D1の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のGLT6D1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるGLT6D1依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびGLT6D1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるGLT6D1経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。