GIPC CRISPR Activationプラスミド (h): sc-402863-ACT

ヒトGIPC1は、GIPC（GAIP-interacting protein, C terminus）をコードしており、PDZドメインを有するアダプターとして、多様な膜貫通受容体や輸送（トラフィッキング）関連因子のC末端モチーフに結合し、エンドサイトーシス、リサイクリング、ならびにシグナルの区画化を協調的に制御します。GIPCはミオシンVIなどのタンパク質との相互作用を介して、受容体複合体をアクチン細胞骨格やモーター機構へと連結し、受容体の利用可能性や下流のシグナル出力を規定します。これらの足場機能により、GIPC1は細胞接着、遊走、増殖因子受容体シグナル伝達のダイナミクスを制御する経路への関与が示唆されています。GIPC1の発現異常、あるいはGIPCを中心とするトラフィッキングネットワークの変化は、がん遺伝子シグナル、浸潤性の挙動、さらに受容体のターンオーバーや空間的なシグナル制御が破綻する他の疾患に関連する表現型と結び付けられています。

GIPC CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性GIPC1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

GIPC CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における GIPC1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はGIPC1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性GIPCの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のGIPC1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるGIPC依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびGIPC1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるGIPC経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。