GH Plasmídeo duplo de Nickase (m): sc-420548-NIC
- alvos específicos: mouse
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- GHO plasmídeo de dupla Nickase (m) consiste num par de plasmídeos cada um contem D10A com mutação na nuclease Cas9 nuclease e um alvo especifico de RNA guia com 20 na (gRNA), criado para nocautear a expressão genética com maior especificidade do que o seu correspondente CRISPR/Cas9 KO
- Sequencias pareadas de gRNA são de aproximadamente 20 bp para permitir que os cortes duplos no DNA genômico mediados pela Casp ocorram com especificidade , o que se assemelha ao corte pela DSB
- Cada plasmídeo pertencente ao par de plasmídeos contem um gene de resistência a puromicina para seleção; o outro plasmídeo do par contem um marcador de GFP para a visualização e confirmação da transfecção
- O Plasmídeo Double Nickase GH (m) e o Plasmídeo Double Nickase GH (m2) codificam designs distintos de pares de gRNA direcionados para Gh. Um ou ambos os desenhos podem estar disponíveis
- Após a transfecção, a eficácia do processo de nocaute genético por ser testada WB, IF ou IHC usando o anticorpo:GH Anticorpo (B-10): sc-515021
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
GH Plasmídeo duplo de Nickase (m) | sc-420548-NIC | 20 µg | $410.00 |
O gene Gh do camundongo codifica o hormônio do crescimento (GH), um fator endócrino de origem hipofisária que regula o crescimento somático pós-natal, a partição de nutrientes e a homeostase metabólica. A sinalização do GH é iniciada pela ligação ao receptor do hormônio do crescimento e pela ativação subsequente de JAK2/STAT5, com interações adicionais com as vias PI3K–AKT e MAPK, que influenciam programas transcricionais no fígado, músculo, tecido adiposo e osso. Em modelos experimentais, alterações na atividade do eixo GH modulam a produção de IGF-1, a sensibilidade à insulina, a mobilização de lipídios e a remodelação esquelética, fornecendo ligações mecanísticas com fenótipos de crescimento e características de doenças metabólicas. Assim, a interrupção de Gh é usada para estudar a regulação endócrina do desenvolvimento, do metabolismo e de redes gênicas específicas de tecidos.
GH O Plasmídeo de Nickase Dupla (m) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus Gh em linhas celulares mouse. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de Gh. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função Gh. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.
Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com Gh interrompido.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.