Ggnbp2 CRISPR Activationプラスミド (m): sc-432161-ACT

マウスGgnbp2（gametogenetin-binding protein 2）は、核関連タンパク質をコードしており、生殖細胞の生物学および精子形成に関与すると考えられています。精巣での高い発現が報告されており、雄性減数分裂におけるクロマチン制御や転写制御に関連する役割が示唆されています。その機能は、生殖細胞の分化、ゲノム完全性、精子細胞（スパーマチッド）の成熟を司る細胞プログラムに関わり、これらの過程は協調したDNA修復とエピジェネティックなリモデリングに依存します。実験系ではGgnbp2発現の攪乱が雄性不妊様の表現型の欠陥と関連づけられており、生殖生物学研究におけるマーカーおよび調節因子としての利用を支持します。その結果、Ggnbp2は、生殖系列の発生および精巣特異的遺伝子発現を支える制御ネットワークの解明に向けた研究対象として注目されています。

Ggnbp2 CRISPR活性化プラスミド（m）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性Ggnbp2の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

Ggnbp2 CRISPR 活性化プラスミド (m) は、ヒト細胞株における Ggnbp2 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はGgnbp2転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性Ggnbp2の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のGgnbp2遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるGgnbp2依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびGgnbp2発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるGgnbp2経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。