Gelsolin Double Nickaseプラスミド (h): sc-401005-NIC

GSNはゲルゾリンをコードしており、ゲルゾリンはCa²⁺によって調節されるアクチン結合タンパク質で、アクチンフィラメントを切断し、端をキャップすることで細胞骨格を再編し、細胞形態、接着、運動性を制御します。アクチン動態を調節することにより、ゲルゾリンはエンドサイトーシス、膜輸送、アポトーシスなどの過程に影響を及ぼし、さらに細胞骨格のターンオーバーを協調的に制御するホスホイノシチド経路やRhoファミリーGTPase経路を含むシグナル伝達ネットワークとも連関します。ゲルゾリンの活性や発現の変化は、細胞移動や浸潤の異常な表現型と関連することが示されており、炎症、神経生物学、心血管リモデリングなど多様な文脈で研究されています。GSNの病的バリアントは、アミロイド形成性のタンパク質ミスフォールディング疾患とも関連しており、タンパク質恒常性および細胞外マトリックス関連病態における重要性を支持しています。

Gelsolin ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における GSN 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、GSN内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、GSNの機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、GSNが破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。