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GDF-11CRISPR激活质粒(m) | sc-420524-ACT | 20 µg | $397.00 |
生长分化因子11(Gdf11)基因编码GDF-11,这是一种分泌型的TGF-β超家族配体,可通过activin II型受体和ALK4/5传递信号,从而激活依赖SMAD2/3的转录程序。在小鼠组织中,GDF-11参与胚胎期的模式形成以及出生后对祖细胞动态的调控,并通过对分化与增殖的情境依赖性控制,影响肌发生、神经发生和骨骼发育。该通路与细胞外基质重塑及细胞周期调控相互交织,使Gdf11成为研究发育时序与组织稳态的重要节点。在肌肉消耗、纤维化以及与年龄相关的功能衰退模型中,涉及GDF-11的TGF-β/activin信号失衡已被研究,研究重点在于阐明信号平衡的机制,而非单纯进行表型“挽救”。
GDF-11 CRISPR激活质粒(m)提供了一种靶向、非破坏性的方法,可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性Gdf11的表达。
GDF-11 CRISPR激活质粒(m)是一个由三条质粒组成的协同激活介导(SAM)系统,旨在对人类细胞系中的Gdf11基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变(D10A 和 N863A)的无催化活性的 Cas9(dCas9)为核心,这些突变消除了核酸酶活性,同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合,并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用,并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA,其与两个MS2 RNA适配体融合,这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点,并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送,以确保系统所有组分的平衡表达。
在靶位点组装完成后,SAM复合物结合于Gdf11转录起始位点上游约200 bp处,VP64、p65和HSF1在此协同作用,招募转录 machinery并驱动内源性GDF-11表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同, dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列,从而保留了原生的Gdf11位点,并能够研究内源性位点上依赖于GDF-11的转录反应,使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在Gdf11表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟GDF-11通路恢复的宝贵工具。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。