GDAP2 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-412346-ACT

GDAP2（ganglioside-induced differentiation-associated protein 2）は、神経細胞の維持や細胞分化プログラムに関与すると考えられる保存性の高いタンパク質をコードしており、近年ではミトコンドリア恒常性やストレス応答性シグナル伝達との関連も示唆されています。発現パターンや遺伝学的研究からは、GDAP2が神経生物学において役割を担うことが支持されており、GDAP2活性の変化がエネルギー代謝、オルガネラ動態、プロテオスタシスを制御する経路に影響し得ることが示されています。GDAP2のバリアントは、運動失調を含む神経変性様の表現型と関連づけられており、神経細胞の脆弱性メカニズムを検討するうえでの重要性が浮き彫りになっています。そのため生物医学研究では、GDAP2はミトコンドリア機能や神経変性関連の細胞プロセスと交差する遺伝子制御ネットワークを解析するための標的として利用されています。

GDAP2 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性GDAP2の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

GDAP2 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における GDAP2 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はGDAP2転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性GDAP2の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のGDAP2遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるGDAP2依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびGDAP2発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるGDAP2経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。