GCP-2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-422852

概要

Cxcl5は、顆粒球走化性タンパク質2（GCP-2）をコードしています。GCP-2は分泌型のCXCケモカインで、主にCXCR2を介してシグナルを伝え、急性炎症時における好中球の走化性、活性化、組織への動員（トラフィッキング）を促進します。マウス組織では、CXCL5は炎症促進性の刺激によって誘導され、NF-κBおよびMAPKシグナル伝達の下流にあるサイトカイン／ケモカインネットワークの一部として機能し、白血球のリクルートや局所の免疫微小環境の形成に関与します。このCXCL5–CXCR2軸は、内皮との相互作用の調節、組織リモデリング、宿主防御応答にも寄与します。CXCL5/GCP-2シグナルの破綻は、炎症性病態や腫瘍関連炎症と関連づけられており、骨髄系細胞の生物学、バリア組織、免疫介在性疾患の機序研究において重要です。

GCP-2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるCxcl5遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Cxcl5内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Cxcl5のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、GCP-2タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、GCP-2シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Cxcl5欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• GCP-2の機能に不可欠なCxcl5エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Cxcl5ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• GCP-2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびGCP-2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Cxcl5遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  GCP-2 HDRプラスミド（m）および GCP-2 HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはCxcl5ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のCxcl5標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。