Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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GCN2 더블 틈내기효소 플라스미드 (h): sc-402313-NIC
- Target species: human
- 20 µg of transfection-ready, purified plasmid DNA; Suitable for up to 20 transfections
- GCN2 Double Nickase Plasmid (h) 는 한쌍의D10A mutated Cas9 nuclease 와 타깃특정 20 nt guide RNA (gRNA)를 인코딩하는 plasmid를 포함하고있으며 gRNA는 대응 CRISPR/Cas9 KO보다 높은 특이성을 띤 knockout gene을 발현하도록 디자인되였습니다.
- 한쌍의 gRNA는 약 20bp가량 떨어져 있으며 이는 게놈DNA의 Cas9-mediated double nicking을 발생하여 DSB를 모방합니다.
- 한쌍의 plasmid 중 하나는 selection에 필요한 puromycin-resistance gene을, 다른하나는 형질주입효율을 확인하는 GFP marker를 보유하고있습니다.
- GCN2 더블 니케이스 플라스미드 (h) 및 GCN2 더블 니케이스 플라스미드 (h2)는 EIF2AK4을 표적하는 서로 다른 쌍을 이루는 gRNA 설계를 암호화합니다. 하나 또는 두 가지 디자인 모두 이용 가능할 수 있습니다
- Transfection, gene knockout효율은 WB, IF나 IHC등 방법으로 측정할수있습니다, 권장하는 항체는 GCN2 Antibody (F-7): sc-374609
주문정보
| 제품명 | 카탈로그 번호 | 단위 | 가격 | 수량 | 관심품목 | |
GCN2 더블 틈내기효소 플라스미드 (h) | sc-402313-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
GCN2 더블 틈내기효소 플라스미드 (h2) | sc-402313-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
인간 EIF2AK4는 GCN2를 암호화하는데, GCN2는 비충전(uncharged) tRNA 결합을 통해 아미노산 제한을 감지하고 eIF2α를 인산화하여 통합 스트레스 반응(integrated stress response, ISR)을 개시하는 세린/트레오닌 키나아제이다. 이 신호전달은 전반적인 번역을 감소시키는 한편, 스트레스 적응에 필요한 전사체의 선택적 번역을 촉진하여 영양소 가용성을 단백질 항상성(proteostasis), 자가포식(autophagy), 대사 재프로그래밍과 연결한다. GCN2는 아미노산 결핍 및 기타 세포 스트레스로부터의 입력을 통합해 ATF4 의존적 전사 프로그램을 조절하고, mTORC1 및 염증성 신호전달과의 상호작용(crosstalk)에도 관여한다. 문헌에서는 EIF2AK4/GCN2 활성이 비정상적으로 조절될 경우 스트레스 내성, 면역세포 기능, 대사 균형의 변화와 연관될 수 있음이 보고되어 왔으며, 따라서 스트레스 적응 경로의 기전 연구에서 중요한 노드로 간주된다.
GCN2 더블 니카제 플라스미드(h)는 human 세포주 내 EIF2AK4 유전자좌의 고특이성 편집을 위해 설계된 쌍을 이루는 플라스미드로 구성됩니다. 각 플라스미드는 Cas9 D10A 니카아제와 EIF2AK4 내의 반대 DNA 가닥을 표적으로 하는 고유한 sgRNA를 발현합니다. 반대 DNA 가닥의 인접 부위로 유도될 때, 두 니카아제는 서로 어긋난 단일 가닥 절단 부위를 생성하며, 이는 함께 엇갈린 이중 가닥 절단을 유발하여 두 가이드의 조화된 표적 활성을 필요로 합니다. 이렇게 생성된 DNA 절단은 내인성 세포 복구 경로, 특히 비동형 말단 결합(NHEJ)을 통해 해결되며, 이는 EIF2AK4의 기능을 방해하는 삽입 또는 결실을 초래한다. 표적 부위에서 이중 sgRNA 결합을 요구함으로써, 이중 니킹 접근법은 편집 특이성을 향상시키고 표적 정밀도에 대한 추가적인 제어가 필요한 응용을 위한 보완적인 CRISPR 전략을 제공한다.
편집된 세포를 효율적으로 식별할 수 있도록, 한 플라스미드는 형광 시각화를 위한 GFP를 발현하며, 다른 플라스미드는 항생제 선별을 위한 푸로마이신 내성 유전자를 포함하고 있습니다. 이러한 기능들은 공동 형질 도입된 세포 집단의 효율적인 농축을 지원하며, EIF2AK4 기능이 손상된 클론의 검증을 단순화합니다.
연구용으로만 사용하세요. 진단 또는 치료용이 아닙니다.